Inertsil HILIC色譜柱操作說明

1.色譜柱信息

  Inertsil HILIC液相色譜柱是在高純度硅膠基質上鍵合二羥基丙基的HILIC (Hydrophilic Interaction Chromatography)模式色譜柱，適合用于強極性至中等極性例如一些極性藥物、小生物分子的分離。Inertsil HILIC液相色譜柱從硅膠基質的合成，到化學處理和裝填后的性能檢測，都是在本公司嚴格的產品控制下進行，因此不同批次的柱與柱之間具有優異的重現性;通過獨有的裝填技術填裝的HILIC柱柱床密度均一穩定，從而確保色譜柱具有高柱效，在極性和親水性化合物如碳水化合物、代謝物、有機酸、有機堿、氨基酸、蛋白及多肽水解物等的分離過程中，可作為改變柱選擇性和提高分辨率的分離工具。

  為了能長期保持Inertsil8 HILIC液相色譜柱的優越性能和正確的使用色譜柱，在使用色譜柱之前請仔細閱讀本說明書。

2.使用前的檢查與須知事項

●檢查包裝箱的外觀有無異常。

●打開包裝，檢查色譜柱的填料名稱、尺寸規格、連接形式是否相符。

●色譜柱中封存流動相為乙腈/水=95:5, v/v。

3.色譜柱填料規格

4.色譜柱安裝與操作

  色譜柱在運輸過程中，兩端用堵頭密封。當將色譜柱接入色譜儀器系統時，首先請確保系統中的溶劑和液相柱中封存溶劑是互溶的。如果不能互溶，請采用一種能夠與系統及色譜柱都能互溶的溶劑對系統進行充分過渡之后再將色譜柱連接到系統中，并注意流動相的方向要與柱.上標記的方向保持一致。我公司提供的常規液相色譜柱標準接頭型式為1/ 16英寸Waters接頭螺絲型(如下左圖)， 同時還有耐高壓液相系統的UP型(如下右圖) ( 目前HILIC系列暫不提供UPLC柱)。如果需要其他接頭形式請另行咨詢。

色譜柱連接好之后，請確認無漏液現象之后再進行后續操作。

  新的HILIC柱是保存在乙腈/水(95:5, v/v)的溶液中，在儲存和運輸過程中，硅膠填料可能會干涸,推薦用純的乙腈沖洗10~20倍柱體積對色譜柱進行活化，流速從0.1mL/min緩慢上升到最佳流速。(如果在活化過程中即發現壓力和基線不正常時，請及時聯系我公司工程師及時處理。)然后再用不含緩沖鹽的流動相進行平衡20倍柱體積，再用流動相平衡，待壓

力和基線穩定之后，再進樣分析。

5.樣品與流動相

  為避免色譜柱堵塞，所有樣品及溶劑，包括緩沖溶液在內，在使用前必須用0.45μm或者0.22uμm的濾膜過濾。樣品溶劑需要含60-100%的有機溶劑，水的比例應盡量小，推薦5%的水作為自動進樣器的清洗液。適用于HILIC分離的緩沖鹽體系為甲酸鹽和乙酸鹽，因為即使再很高比例的有機溶劑中它們也有很好的溶解性。避免使用磷酸鹽及其他低溶解性緩沖鹽，以防析出堵塞色譜柱。對于大多數分析樣品，推薦的緩沖鹽濃度為5--20mM。避免使用其他非揮發性緩沖鹽、TFA或者離子對試劑，它們會干擾HILIC分離機理，并抑制MS信號。通常的HILIC應用中，一般使用50-95%濃度乙腈的水溶性緩沖鹽，如甲酸鹽、乙酸鹽或者它

們的酸作為流動相。流動相使用前請務必進行脫氣。

6.色譜柱的保養

●pH HILIC色譜柱可在pH2 ~7.5范圍內使用，為保持色譜柱良好的壽命，請避免較強的酸或堿性樣品或者流動相進入色譜柱。

●耐壓HILIC常規色譜柱耐受壓力為20MPa, HP系列耐壓為50MPa，但是正常的壓力建議控制在耐受壓力的2/3以下。長時間在高壓下運行會對色譜柱造成難以修復的損害，因此系統壓力升高之后，建議盡快排查系統，如果是色譜柱壓力升高，請及時采用適當溶劑沖洗色譜柱。

●溫度 最高操作溫度為60℃，長時間在高溫下操作會顯著降低色譜柱壽命。

●沖洗

1.新柱平衡:新柱是保存在高比例的有機溶劑中，建議先采用色譜柱保存流動相平衡色譜柱一段時間，觀察基線和壓力是否正常，然后再通入流動相。如果流動相中不使用緩沖鹽或離子對試劑，直接用流動相平衡即可;如果流動相使用緩沖鹽，先要用高比例的水相充分過渡20倍柱體積，然后進行流動相平衡。

2.使用完畢后的清洗、保存及再使用時流動相的過渡:

①使用完畢后，先用高比例的水相進行沖洗約20倍柱體積。

②如果流動相中不使用緩沖鹽或離子對試劑，上述①完畢后，用100%的有機溶劑沖洗約20倍柱體積，然后此條件下進行保存，再使用時直接沖流動相即可。

③如果流動相中使用緩沖鹽或離子對試劑，上述①完畢后，用100%的有機溶劑沖洗約20倍柱體積，然后此條件下進行保存，再使用時請務必用高比例的水相充分過渡20倍柱體積，再通入流動相。

●儲存色譜柱 長期不用， 建議日常沖洗方法完成之后，再用純乙腈沖洗20倍柱體積，然后保存在純乙腈中，之后卸掉色譜柱，兩端用堵頭密封，并放在溫度變化小的場所。